镜像自我认知(MSR)被视为自我意识的证据，而通过标记测试即动物触摸或刮擦放置在其身体上的标记，该标记的位置只能在镜子中间接看到，用于确定动物的MSR能力。除了黑猩猩之外，其他动物通过标记测试的证据一直受到批评，因此没有得出什么结论。
通过解决针对以前对清洁鱼Labroides dimidiatus的工作提出的批评，一个由大阪市立大学研究生院的Masanori Kohda领导的国际研究小组提供了进一步的证据--表明这种鱼具有MSR的能力。
这项新的实验最近发表在《PLOS Biology》上。
Kohda教授说道：“以前利用L. dimidiatus喉咙部位的棕色标记，我们已经表明四条清洁鱼中的三条在镜子前游动后会刮擦喉咙数次，这个数字跟对其他动物如大象、海豚和喜鹊所做的类似研究相当。”
然而对这一结果的批评之一是样本量和需要重复研究以显示积极的结果。通过跟德国马克斯-普朗克动物行为研究所和瑞士纳沙泰尔大学的研究人员合作，这项研究将样本量增加到18条清洁鱼，其中17条表现出跟之前研究相同的行为，取得了94%的积极结果。
Kohda教授说道：“在看了对猴子、猪、狗、猫等所做的类似研究后，这些研究显然是阴性的，我们想知道这些动物没有注意到这个标记的原因是否是因为它不代表它们自然环境中会关注的东西。在我们之前的研究中，我们使用了一个棕色的标记，因为它可能看起来像一个小的寄生虫，而这是L. dimidiatus的主要食物来源。”
针对这一点的批评是标记的物理感觉，再加上在镜子中看到的棕色标记可能会引发并不确切地表明MSR的行为。为了解决这个问题，研究小组通过注射3毫米深的棕色标记测试了鱼对它们喉咙中的物理刺激的反应。在这样的深度，标记几乎不可见，但他们发现，无论镜子是不存在还是存在，注射较深的鱼都会以类似的速度刮擦它们的喉咙。为了进一步巩固在MSR研究中使用跟动物生态相关的标记的重要性，研究小组发现，注射了绿色或蓝色标记的鱼没有表现出刮擦行为。
最后，一些反对者想知道L. dimidiatus是否将镜像识别为自己而不是另一条鱼。镜像训练的动物是指被介绍给自己的镜像并经历三个步骤：首先，它表现出某种攻击性行为，因为它很可能认为镜像是另一种动物；然后，它表现出不自然的，但非攻击性的动作，因为它确认镜像不是另一种动物；最后，它反复地看自己的身体且没有攻击性。在这一点上，MSR是可能的，因为它现在可以看到标记并试图将其刮掉。
Kohda教授表示：“我们以前的研究证明了L. dimidiatus的MSR；然而对其他动物的研究表明，仅仅移动镜子就会重新激发攻击性行为，这表明动物只学会了空间应急措施，而不是MSR。”为了解决这个问题，研究小组将经过镜子训练的清洁鱼转移到水箱一侧有镜子的水箱中，三天后再转移到另一侧有镜子的水箱中，结果看到这些鱼在两个水箱中都没有对它们的镜像表现出攻击性。
此外，为了确保通过标记测试的L.dimidiatus真正认识自己，他们将经过镜子训练的鱼放在用透明玻璃隔开的相邻鱼缸中。两到三天后，当鱼儿们在很大程度上减少了对彼此的攻击性行为时，他们在第二天晚上以标准方式进行标记。第二天早上，在相互接触的120分钟内没有一条鱼刮擦喉咙。
“这一结果表明，对另一条鱼的视觉、生态相关的刺激不足以诱发被标记对象的刮喉行为，”Kohda教授说道，“我们仍有许多工作要做，特别是在定量方面，以证明鱼类以及其他动物具有MSR的能力；然而，作为这项研究的结果，我们重申了我们以前研究的结论，即动物的自我意识或镜像测试的有效性需要修改。”